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流式细胞仪分选

    流式细胞仪(Flow Cytometer)是一种在功能水平上对单细胞或其他生物粒子进行定量分析和分选的检测手段,可以每秒钟分析上万个细胞,并能同时从一个细胞中测得多个参数。其应用范围非常广泛,而且还在不断增加。当然,细胞分选也是它的重要应用之一。它能够根据每个细胞的光散射和荧光特征,将特定的细胞从细胞群体中分选出来。每次一个细胞。所以人们又常常将流式细胞仪称为荧光激活细胞分选仪(fluorescence-activated cell sorter, FACS),其实FACS并不是流式细胞仪的通称,它是BD公司的注册商标。


细胞分选的原理
当经荧光染色或标记的单细胞悬液放入样品管中,被高压压入流动室内。流动室内充满鞘液,在鞘液的包裹和推动下,细胞被排成单列,以一定速度从流动室喷口喷出。在流动室的喷口上配有一个超高频的压电晶体,充电后振动,使喷出的液流断裂为均匀的液滴,待测细胞就分散在这些液滴之中。将这些液滴充以正、负不同的电荷,当液滴流经过带有几千伏的偏转板时,在高压电场的作用下偏转,落入各自的收集容器中,没有充电的液滴落入中间的废液容器,从而实现细胞的分离。


流式细胞分选的特点
1.
少量细胞分选时,流式细胞分选精确度高(99%以上),速度快。目前,先进的流式细胞仪的分选速度可达25 000个细胞/秒以上,比传统的分选速度提高了很多倍,原来需要一天的工作现在只需要几小时就能完成。不过流式细胞仪分离细胞的量还是有一定的限制,一次分离的最大合理量约为108个细胞。如果细胞量超过109个,为避免细胞活性降低,可采取分段式收集。


2.
可以同时进行多个Marker分选,正选负选同时进行。以前的流式细胞仪只能给液滴充上正电荷或负电荷,因此在电场中只能向左或向右偏转,即两路分选。现在的仪器可以给液滴充以不同的电量,从而调整液滴的偏转角度,实现多路分选。BDFACSAria流式细胞仪就可以进行四路分选。


3.
不仅仅限于表面抗原,流式细胞仪可以根据任何能检测到的发光度(如细胞体积)或荧光(如DNARNA或蛋白含量,酶活性,特异抗原)散射度差异来分离细胞。如果能保证流式细胞仪的无菌状态,那么分选后的细胞还可以进行培养或其他分析。


4.
如果只是偶尔做几次细胞分选的话,采用流式分选还是比较经济的,只需要准备样品和抗体,交纳一定的仪器使用费即可,不需要购买配套的设备。