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双向电泳

    蛋白质组学是一门有技术发展而驱动的学科,实验技术是真实揭示生物现象的重要基础。目前蛋白质组学研究的焦点是对蛋白序列、表达量及修饰位点分析,这些需求主要通过质谱技术实现。基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱(MALDI-TOF/TOF-MS)具有分析速度快、灵敏度高及抗杂质干扰能力强等特点,是当前蛋白质领域中的研究热点之一;液相色谱串联质谱连用技术(LC-MS/MS)具有信息量大、通量高的特点,是蛋白质组学常用的技术。

一、蛋白质组学平台及对外服务
 
【1】蛋白质定性;
1、 SDS-PAGE分离+LC-MS/MS鉴定
2、 离子交换+RPLC-MSMS鉴定
3、 RP-RPLC-MSMS鉴定
4、 单个蛋白鉴定
 
【2】蛋白质定量:
1、第一代定量技术:双向凝胶电泳2DE+质谱MALDI-MS/MS技术。
2、第二代定量技术:
A、SILAC标记+ LC/MSMS技术。
B、ITRAQ标记+ LC/MSMS技术。
C、TMT标记+ LC/MSMS技术。
D、CH2O标记+ LC/MSMS技术。
E、H2O标记+ LC/MSMS技术。

【3】第三代定量技术:Labelfree-LC/MSMS。

 

 

二、提供检测项目

【1】分子量测定:蛋白质、纳米材料、高分子聚合物、核酸

【2】蛋白质鉴定:
1、肽质量指纹谱法(PMF)
2、肽序列标签法
3、N末端测序法

 

【3】蛋白质修饰位点的鉴定
1、磷酸化
2、糖基化
3、泛素化
4、乙酰化

【4】iTraq差异蛋白鉴定

 

 

 

三、样品测试服务

【1】样品制备    

蛋白质的提取、亚细胞器分离、蛋白定量、SDS-PAGE

【2】双向电泳     

等电聚焦(IEF)、胶条平衡、SDS-PAGE、染色、扫描 、图像处理分析

1、一维等电聚焦仪IPGphor(Pharmacia)
 该设备为双向电泳及一维等电聚焦专用设备,可将电压升至8000V,在蛋白质等电点方向的分辨率可达0.01pH。

2、垂直电泳系统
该设备可在垂直方向上运行20´20cm,1mm厚的变性或天然凝胶,既可进行一维蛋白质分析和制备分离,也可配合13cm等电聚焦系统进行双向电泳的第二维分离。

3、垂直电泳系统GE-S600
 该设备可在垂直方向上运行10
´10 cm、0.75mm厚的变性或天然凝胶,既可进行一维蛋白质分析和制备分离,也可配合7cm等电聚焦系统进行双向电泳的第二维分离。

4、双向电泳分析软件ImageMaster 2D Elite 7.0
 该软件对双向电泳分离蛋白质进行蛋白点识别检测、背景消除、等电点和分子量校正、凝胶对比和差异定量分析等。也可对基因或蛋白芯片、薄层层析进行定量分析或识别。

5、蛋白转印系统  可以配合一维或二维凝胶进行蛋白转印,配合下一步氨基酸组成分析或蛋白端基序列测定。

6、Ettan DALT II 系统(pharmacia)
 可同时进行12块24cm干胶条的二维电泳系统,其制冷、电源等关键部件实行了一体化。