高压冷冻固定技术（high pressure freezing，HPF）主要是利用高压（2100 bar以上）液氮对生物组织细胞样本进行毫秒级别快速冷冻，将200 um厚的样品迅速凝结成玻璃态。玻璃态的样品内部水分呈非晶态的固态，体积与密度都与液态水相同，使细胞的超微结构能够更真实地被保存下来。与常规化学固定制样相比具有显著的优势，可最大限度的保持样品的自然状态和真实结构，避免化学固定对样品带来的损伤和假象。HPF制样后既可以通过冷冻替代技术利用有机溶剂在低温下将样品中的水份替代出来，缓慢回到常温，然后经过树脂渗透、包埋聚合、超薄切片后进行常温透射电镜的观察；也可以直接将高压冷冻的样品进行冷冻超薄切片，再使用冷冻透射电镜进行观察。总之，样品制备和成像质量在生物样品电镜分析中起着关键作用，需要在不同情况下进行优化，以获得高分辨率的信息，高压冷冻固定技术使细胞原始精细结构得以最大程度真实保存。
分析测试中心最新购置的高压冷冻固定仪已经建立了完善的动物组织和培养细胞的高压冷冻固定-冷冻替代脱水电镜制样技术方案，欢迎广大师生咨询使用。
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