透射电镜标本取样要求

时间:2023-12-11浏览:402


一、组织标本:

1、准备:至电镜室索取或自己配制2.5%戊二醛固定液,置4℃冰箱备用;

2、(1)取样:要求如下:

 ①轻:机械损伤要小,刀锋利,免牵拉、挫伤及挤压(采用刮胡刀片切样本);

 ②小:组织体积要小,不超过1mm3;可为1×1×1mm正方体、1×1×3mm长方体状、1×3×3mm薄片状(需要定位或特殊标本,如神经、皮肤、血管等,请提前咨询电镜室老师);

 ③快:动作迅速,动物处死后3分钟内取材投入固定液内,脑、脊髓等样本需要灌注固定后取材;

 ④准:取材部位要准确,组织小块必须为要观察部位,如观察肾小球需为肾皮质取材。

2)方法:组织块﹥﹥洁净的载玻片(滴一滴戊二醛)﹥﹥锋利刀片切成1mm3﹥﹥投入2.5%戊二醛固定液内(1.5 mL EP管)﹥﹥4℃冰箱保存(千万不能结冰)

二、细胞标本:

生长在培养瓶和培养板中的培养细胞取材(106个细胞),悬浮细胞可直接离心,贴壁细胞应先倒出培养液,采用胰蛋白酶消化或用细胞刮刮下。然后带培养液置于1.5 mL EP进行离心(10001500 rpm5 min左右。离心完毕倒出培养液,管底的细胞团不要打散,沿管壁缓慢加入1 mL2.5%戊二醛固定液, 4℃保存。

三、负染标本:

适用于外泌体,纳米材料等。预约时间:一个样预约至少1小时,预约如审核通过,送标本:在所约时间提前2小时将标本送至学海楼A139,到A133联系老师进行标本制备。

取材要求:样本悬液100微升,稀释到合适浓度。