流式分选实验注意事项

时间:2023-12-11浏览:238


分选前:

1、确保液滴延迟时间准确,调节Drop delay>98%,保证细胞分选纯度;

2、先用无菌水清洗分选仓,洗去残留的PBS,再用酒精棉无菌消毒,尤其是waste drawer和电极板;

3、选择合适的喷嘴,易碎的细胞尽量选用低压和大喷嘴。进行96孔板分选时,尽量采用大喷嘴。分选前确保喷嘴没有堵塞;

4、确保液流稳定,如果不稳定,请用无菌水冲洗,待液流稳定后再分选;

5、酒精或clean清洗后,用无菌水大量冲洗,洗去残留的的酒精或clean,保证分选细胞活性。

分选时:

1、上样前用内加适量抗生素的1×PBS进行管路冲洗,用4070um无菌滤膜进行过滤;

2、选择合适的进样速度,保证效率>75%70um喷嘴流速一般不超过20000cell/s100um喷嘴一般不超过6000cell/s(按具体情况决定);

3、分选时收集管里保证一定的培养液,调节时保证液滴打在液面上,防止细胞打在管壁上影响活性。15ml收集管液面高于3ml5ml收集管液面高于1ml

4、收集管中培养液抗生素浓度是正常培养液的2-3倍(按具体情况决定);

5、如果分选过程中喷嘴堵塞,请进行超声清洗,安装完后重新调节Drop delay

分选后:

1、分选下来的细胞请尽快换液无菌培养或者进行其他实验操作。

2、返回实验室途中请注意隔离、恒温等保护措施。