一、开机：
打开仪器的主电源，打开电脑电源。待仪器自检完毕（主机控制面板白灯常亮）。双击桌面上UNICORN图标，进入操作界面。
二、准备工作溶液和样品：
所有的工作溶液和样品必须经过0.45µm的滤膜过滤（样品也可高速离心后取上清使用）。缓冲液需在使用前用低频超声脱气10min。
三、清洗及管道准备：
首先将A1管道入口放入平衡缓冲液（binding buffer）中，将B1管道入口放入洗脱缓冲液（elution buffer）中，在system control窗口点击工具栏内的manual，选择 execute manual instructions→pump→pump A wash和pump B wash，选中A1和B1入口，点击execute。泵洗完成后自动停止。
四、安装层析柱：
在manual instructions里选择pump→system flow，输入流速1 ml/ml，insert；选择Alarms→alarm pre column pressure，设置high alarm（输入填料的耐受压力，可在填料说明书中查到），insert，execute。待Injection Valve的1号位管道流出溶液后，将管路接入柱子的上端，稍微拧紧后将柱下端的堵头卸掉接入管道，连上紫外流动池。
五、开始纯化：
1、选择检测波长，Monitors→Wavelength→UV1, UV2, UV3 (可以只打开一个波长) 等待柱子平衡好了（观察UV、COND、pH的数值和变化趋势）就可以准备上样。此时将紫外调零，选择Monitors→auto zero UV，exectue。
2、用样品环上样：将样品吸进注射器，推掉气泡，从injectionValve的3号位推入, 推好后不要取下注射器。在manual instructions里选择flowpath→injection Valve→inject，execute。
3、用泵上样：将A2入口放入样品中，manual instructions里选择flowpath→A inlet→A2, insert, flowpath→injectmark, insert, execute待样品上完后，在manual instructions里选择flowpath→A inlet→A1,使用平衡缓冲液继续清洗柱子。
（2和3任选一种方式）
4、洗脱：上样后用平衡缓冲液尽量将穿透峰洗回基线。在manual instructions里选择pump→gradient，按照自己的工艺选择target B（100％）和length（10CV）。
5、设定收集：
（1）固定体积收集：选择Fraction collection→Fractionation, 选择收集管tube type，输入每管收集体积，exectue。结束固定体积收集选择Fraction collection→Stop fractionation，exectue。
（2）峰收集：选择Fraction collection→Peak fractionation Parameters→UV Level, 设定峰收集的参数，选择Fraction collection→Peak fractionation设定峰收集每管收集的体积，exectue。结束峰收集选择Fraction collection→Stop peak fractionation，exectue。
六、清洗泵及卸下层析柱：
将A1和B1入口放入纯水中，启动pump wash功能冲洗A泵和B泵及整个管路。然后再将A1和B1入口放入20％乙醇中，同样操作让乙醇充满整个管路。给系统一个慢流速，设置系统保护压力，然后先拆柱子的下端接头，在滴水的状态下将堵头拧上。再拆柱子上端接头，拧上上端堵头。整个过程防止气泡进入层析柱。
七、关闭电源：
从软件任一窗口File命令栏中点击退出。关闭ÄKTA主机电源，关闭电脑电源。
