一、开机
1、打开 Monolith 设备（开关在机器后面板左下侧）；
2、打开电脑，启动 MO. Control 软件。
二、实验操作
1、Start a New Session 或 Browse Previous Session；
2、实验命名并保存；
3、选择荧光通道（BLUE/RED）；
4、选择实验类型：
1）：Pretest：主要是用于检测荧光分子的荧光强度、样品粘附以及聚集情况；
2）：Binding Check：检测荧光分子中加或者不加配体分子后的信噪比，从而初步检测两分子是否有相互作用；
3）：Binding Affinity：主要用于测定两个分子相互作用的亲和力（以平衡解离常数 Kd 值表示），这也是 MST 实验最常用的功能 ；
4）：Expert Mode：若您已经熟练掌握 MST 实验以及操作软件以后，您可以使用该模式对实验进行更灵活的专家模式设置 ；
5、数据分析；
6、关机。
三、预实验（Pertest）
1、实验计划（ Plan Your Experiment ）
A：Target：
1）命名 Target（荧光分子），默认为“MyTarget”；
2）输入荧光分子的储存浓度（工作浓度的 2
）；
B: 描述实验所用 Buffer ；
C：选择实验所用毛细管 ；
D：系统设定：
1）Excitation Power 设为“auto-detect”，或者手动设置 Excitation Power 使得荧光分子的荧光值＞3000（for NT.115 Pico）或 300（for NT. 115）
2）MST Power 使用默认设置即可（Medium）；
E：点击“Go to Instructions”按钮；
2、Instructions
A：按照 Instructions 上的要求准备样品 ；
B：用 2 个毛细管加载不同浓度的荧光分子并放置在样品托上（高浓度的放在 1 号），打开仪器放入样品托；
C：点击“Start Measurement”按钮 ；
3、Result
A：查看 Capillary Scan 以了解荧光分子的荧光强度、粘附情况和均一性；
B：查看 MST 曲线以了解是否存在样品聚集；
C：点击“Review”按钮查看更多信息 。
四、Binding Check（可选）或 Binding Affinity Experiment
1、Plan Your Experiment：
A：Target ：
1）命名 Target（荧光分子），默认为“MyTarget”；
2）输入荧光分子的储存浓度（工作浓度的 2
）；
3）软件将根据检测器类型自动计算荧光分子的建议工作浓度。也可以通过点击铅笔符号进行人工输入 ；
B：描述实验所用 Buffer ；
C：选择实验所用毛细管类型 ；
D：系统设定 ：
1）选择 Excitation Power（自动选择或者手动设定）；
2）选择 MST Power（默认为 Medium）；
E：Ligand（配体分子）：
1）命名配体分子，默认为“MyLigand”；
2）预估 Kd 值（可选）；
3）输入非标记分子（Ligand）的储存浓度（起始工作浓度的 2
）；
4）配体分子
比稀释的起始浓度为储存浓度的 1/2，一般起始浓度应大于 Kd 值的 50
以上，如果 Kd 未知，应选用较高浓度作为起始浓度。可以点击铅笔符号人工输入配体浓度 ；
5）点击“Go to Instructions”按钮进入下一步；
2、Instructions ：
A：按照 Instructions 提示准备样品；
B：将配制好的样品加载入毛细管并放置在样品托上（注意手不能碰触毛细
管中间部位），打开仪器放入样品托；
C：点击“Start Measurement”按钮进行下一步测试 ；
3、Result：
A：查看 Capillary Scan 以了解荧光分子的荧光强度、粘附情况和均一性，查看 MST 曲线以了解是否存在样品聚集；
B：查看 Dose response 以了解信噪比；
C：点击“Review”查查看更多信息。
